山东医药：携载锦波生物·重组人源化胶原蛋白的卡波姆凝胶喷剂制备及对大鼠口腔溃疡愈合作用观察

背景

口腔溃疡是常见于口腔黏膜的溃疡性病损，患病率在5%～25%。其病因多样，包括遗传、免疫因素、局部刺激及外伤等，会影响患者生活质量和心理健康。目前，针对口腔溃疡的干预措施主要有两类：物理性干预，利用成膜材料覆盖溃疡表面进行物理隔绝；药物干预，通过抗炎药、局部麻醉药等治疗。但口腔内唾液冲刷会稀释药物浓度，缩短停留时间，限制治疗效果。卡波姆是高分子量丙烯酸聚合物，黏附特性出色，971P型多用于口服剂型、皮肤用药等。

锦波生物·重组人源化胶原蛋白是优异生物学材料，能抑制炎症、促进细胞增殖和组织愈合，且无传播动物病毒风险，安全性高、应用前景广。本研究以卡波姆971P为载药体系，加入锦波生物·重组Ⅲ型人源化胶原蛋白（rhCol Ⅲ）等材料制备喷剂，观察其对大鼠口腔溃疡的愈合作用。

材料与方法

选取可用于口服制剂的卡波姆971P为主要材料，添加不同质量浓度的甘油、磷酸二氢钾（KH₂PO₄）、锦波生物·重组Ⅲ型人源化胶原蛋白（rhCol Ⅲ）等制备凝胶喷剂。使用醋酸灼烧法建立大鼠口腔溃疡模型。

分组：随机分为3组：空白对照组、卡波姆组（采用不含rhCol Ⅲ的卡波姆凝胶喷剂治疗）、胶原蛋白组（采用含rhCol Ⅲ的卡波姆凝胶喷剂治疗）。

观察指标：观察凝胶喷剂在不同pH下的喷出性能、不同缓冲剂对凝胶喷剂粘度变化的影响、不同pH卡波姆凝胶对胶原蛋白溶解度的影响；比较各组大鼠溃疡愈合率及黏膜组织HE染色结果。

结果

1、不同粘度卡波姆凝胶喷剂喷出性能比较通

携载重组人源化胶原蛋白的卡波姆凝胶喷剂粘度在2500~3000mpa·s，具有良好的喷出性能。

2、不同浓度缓冲剂对卡波姆凝胶喷剂粘度的影响

随着离子溶度的升高，卡波姆粘度不断下降，P均<0.05。

3、不同pH卡波姆凝胶中胶原蛋白溶解度比较

当凝胶pH是4时，卡波姆中有大量白色团块（未溶解的胶原蛋白），继续延长搅拌时间白色团块未减少；往凝胶中继续缓慢少量添加KH₂PO₄并不断搅拌，随着pH不断升高，白色团块不断减小，当pH升高到5左右，白色团块消失（见图1）。

4、各组大鼠溃疡愈合率比较

空白对照组、卡波姆组、胶原蛋白组制模后第3天溃疡愈合率分别为38.7%、45.6%、53.1%，空白对照组与胶原蛋白组比较，P<0.05；空白对照组、卡波姆组、胶原蛋白组制模后第5天溃疡愈合率分别为62.9%、72.4%、88.5%，胶原蛋白组分别与空白对照组、卡波姆组比较，P均<0.05。

5、各组大鼠黏膜组织HE染色比较

制模后第3天，各组口腔黏膜上皮处均有缺损，空白对照组缺损最大，上皮层和固有层中单核细胞、多形核细胞等炎症细胞数量较多，新生血管数量较少；相比于空白对照组，卡波姆组炎症细胞数量减少，新生血管数量较多；而相比于其他两组，胶原蛋白组炎症细胞相对最少，新生血管数量较多，且缺损面积减少；制模后第5天，空白对照组黏膜上皮尚有缺损，炎症细胞数量较多；相比于空白对照组，卡波姆组上皮缺损和炎症细胞数量减少，新生血管数量较多；阳性对照组相比于其他两组，炎症细胞数量最少，新生血管数量明显增多，上皮缺损已完全愈合。（见图2）。

讨论

口腔溃疡是常见口腔黏膜疾病，溃疡处黏膜上皮有持续性缺损与破坏，表面覆黄白色假膜，周围充血水肿。其发生发展伴炎症水平变化及组织破坏修复，愈合需炎症降低、细胞增殖迁移、新生血管生成及再上皮化等复杂生理过程。初期创伤区引发炎症反应，炎症细胞对伤口愈合至关重要，但愈合阶段过强过烈的炎症反应会有不良影响。同时，丰富的血液供应对溃疡愈合也至关重要，促进新生血管生成是促进愈合的重要手段。

目前，针对口腔溃疡的干预措施有物理性和药物性两类。物理性干预利用成膜材料形成保护膜隔绝；药物性干预使用抗炎药、局部麻醉药等。但口腔环境特殊，唾液冲刷会稀释药物浓度、缩短停留时间，限制治疗效果，提高药物治疗效果是亟待解决的问题。卡波姆作为亲水赋形剂广泛应用于口腔和皮肤给药，其溶液粘度随pH升高显著上升。携载重组人源化胶原蛋白的卡波姆凝胶喷剂粘度适宜、pH合适，加入缓冲剂KH₂PO₄后，可减少离子转移，避免粘度下降，还能使喷剂作用于溃疡处时pH值上升、粘度升高，延长药物停留时间。实验显示，从第3天起，胶原蛋白组溃疡愈合率显著高于其他组；HE染色结果表明，rhCol Ⅲ能显著抑制溃疡处炎症水平，促进新生血管生成，加速大鼠口腔溃疡愈合，为其在治疗口腔黏膜疾病中的应用提供了实验依据。

结论